LAG-3抑制性共刺激分子和慢性HBV感染关系的研究

【摘要】背景和目的淋巴细胞活化基因-3分子(lymphocyteactivationgene-3,LAG-3)是一种独立免疫负调节分子,具有维持内环境稳定和参与免疫调节的功能,与慢性病毒感染导致的CD8+T细胞耗竭密切相关。慢性乙型肝炎的发病机理主要是一种免疫病理反应,HBV持续感染与特异性CD8+T淋巴细胞应答功能低下有关。本文主要探讨LAG-3与慢性乙肝疾病进展的关系,为寻求新的抗病毒治疗策略提供新的思路。对象和方法1研究对象筛选2012年2月～2013年6月在浙江大学附属第一医院感染科门诊和住院HBV感染者90例,同时以18例正常健康人作为对照组,结合临床资料将其分为三组,分别为：慢性乙型肝炎患者组、慢性无症状HBV携带者组及正常对照组。2实验方法1)外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMC)分离空腹静脉采集全血标本,采用Ficoll淋巴细胞分离液分离PBMC.2)CD8+T淋巴细胞CD223的测定采用流式细胞技术测CD8+T淋巴细胞CD223(LAG-3)表达。3)细胞内IFN-γ的测定采用流式细胞技术测定,通过破膜、染色,测定表达或不表达LAG-3的CD8+T细胞内细胞因子IFN-γ的分泌差异。4)LAG-3抗体阻断对淋巴细胞分泌IFN-γ的影响(ELISPOT法)。5)HBV病毒学指标的检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe及抗HBc采用化学发光微粒子免疫法(CMIA)检测；HBV-DNA定量采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测,截止值为103拷贝/m1。6)血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定使用HITACHI7600-110型全自动生化分析仪测定。7)数据的统计学处理采用SPSS13.0统计软件包及GraphPadPrism5软件进行统计学分析。结果1)慢乙肝患者组淋巴细胞表面CD8+CD223+分布频数明显高于正常对照组和慢性HBV携带者组,有统计学意义(P<0.01)。2)慢乙肝患者中ALT高DNA低组和ALT高DNA高组淋巴细胞表面CD8+CD223+分布频数明显高于正常对照组(P<0.05)。而慢乙肝患者中ALT低DNA低组、ALT低DNA高组淋巴细胞表面CD8+CD223+分布频数与正常对照组比,均无统计学意义(P>0.05)。3)慢乙肝患者组及慢性HBV携带者组表面CD8+CD223分布频数与相应的ALT水平有明显的正相关性。(P=0.03,r=0.23)。4)慢乙肝患者PBMC中,IFN-γ+在CD8+CD223-细胞的分布频数明显高于其在CD8+CD223+细胞的分布频数(P=0.02)。5)慢乙肝患者PBMC在乙肝核心抗原及CD223抗体的作用下斑点形成细胞数明显高于乙肝核心抗原刺激组(P<0.01)、乙肝核心抗原加同型IgG组(P<0.01)及乙肝核心抗原加PD-L1组(P=0.01)；慢乙肝患者PBMC在乙肝核心抗原加PD-L1及CD223抗体作用下斑点形成细胞数明显高于乙肝核心抗原加PD-L1组(P=0.03)而其与乙肝核心抗原加CD223抗体组无显著性差异(P>0.05)结论1)慢性乙肝患者外周血CD8+T细胞表面LAG-3表达明显增加,且与肝脏炎症程度成正相关,而与HBVDNA载量无关。2)慢性乙肝患者中,高表达LAG-3的CD8+T细胞功能受损,表现为其分泌细胞因子IFN-γ的水平下降。3)加入LAG-3抗体阻断,可恢复慢性乙肝患者外周血CD8+T细胞功能,并且LAG-3抗体联合PD-L1阻断,对CD8+T细胞功能的恢复优于单一PD-L1阻断。
【作者】叶波；
【导师】陈瑜；
【作者基本信息】浙江大学，临床检验诊断学，2013，硕士
【关键词】乙型肝炎；慢性；T细胞耗竭；LAG-3；流式细胞术；

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